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http://ir.cmu.edu.tw/ir/handle/310903500/24702
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| 題名: | 13-METHYLTETRADECANOIC ACID,支鏈飽和脂肪酸所導致的K562癌細胞的細胞凋亡和生長抑制情形;13-METHYLTETRADECANOIC ACID, A SATURATED BRANCHED CHAIN FATTY ACID, INDUCES GROWTH INHIBITION AND APOPTOTIC CELL DEATH IN K-562 CANCER CELL |
| 作者: | 黃曉妘;Huang hsiao yun |
| 貢獻者: | 中國醫藥大學醫學研究所 |
| 關鍵詞: | 細胞凋亡;白血病;脂肪酸;apoptosis;leukemia;fatty acid |
| 日期: | 2004 |
| 上傳時間: | 2010-01-20 16:53:39 (UTC+8) |
| 摘要: | 本論文主要之研究目的，在探討13-methyltetradecanoic acid（13-MTD）對於K-562細胞之生長抑制作用及其誘導K-562細胞凋亡的機制。首先，我們給予K-562細胞不同濃度之13-MTD（0 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml），分別處理2、4、6、12、24小時之後，藉由WST-1 assay實驗觀察細胞存活數目，結果顯示，80 μg/ml之13-MTD給予K-562細胞分別在6小時（p<0.05）、12小時（p<0.05）及24小時(p<0.01）後能抑制K-562細胞成長，然而在12及24小時後可以明顯抑制K-562細胞成長。40 μg/ml之13-MTD 必須要處理24小時（p<0.05）後，才可以明顯抑制K-562細胞的生長。細胞存活率呈現劑量依存性的抑制，細胞存活率呈現時間依存性的抑制則僅限於40 μg/ml與80 μg/ml。我們進一步藉由DNA裂解要用以確定凋亡情形，給予K-562細胞13-MTD（0 μg/ml、80 μg/ml）處理4、6、12及24小時，結果顯示80 μg/ml的13-MTD給予K-562細胞4小時以後皆可以誘導DNA裂解。進一步在細胞週期的研究方面，K-562細胞經13-MTD（0 μg/ml、20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml）處理2、4、6小時之後，經由流式細胞儀的檢測，發現80 μg/ml 之13-MTD給予K-562細胞6小時的處理之後，K-562細胞可以表現7.6 %的細胞凋亡比例。但是，在各細胞週期當中，DNA數目並無明顯差異。另外，K-562細胞以13-MTD（0 μg/ml、20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml）處理6、12、24小時後，在西方墨點的檢測下，我們發現13-MTD所誘導K-562細胞凋亡相關路徑中，p53蛋白於6、12、24小時表現，皆有依時間和濃度增加的相關性，進而使得下游的p21也被活化，而與凋亡有關的蛋白如Fas以及Bax，也會跟隨著時間和13-MTD濃度的增加而有較多蛋白的表現量。這顯示由13-MTD所誘導的細胞凋亡路徑中，所參與的可能角色，包括了extrinsic pathway(與death receptor pathway有關)及intrinsic pathway(與caspase cascade pathway有關)。綜合以上結果，我們發現13-MTD可以抑制K-562細胞生長，而且此抑制生長的情形可能與其誘導細胞凋亡之作用有關。; To investigate how 13-methyltetradecanoic acid（13-MTD）affects the K-562 growth and study their mechanisms in inducing apoptosis are the main purpose of the research. Various concentrations of 13-MTD（0、5、10、20、40 and 80μg/ml）were applied in K-562 human chronic myelogenous leukemia cancer cells in several different time period （2、4、6、12 and 24 hours）. Through WST-1 assay, data showed that 80μg/ml 13-MTD could significantly inhibit the cell proliferation of K-562 cell death in K-562 after 6 hour（p<0.05）、12（p<0.05） and 24 hours（p<0.01）period. 40μg/ml 13-MTD thereby inhibit the cell proliferation after 24-hour（p<0.05）period. In K-562, WST-1 assay demonstrated that 13-MTD could inhibit their proliferation in dose-dependent manner and also time-dependent inhibition in 40 and 80μg/ml from 2 to 24 hours. DNA fragmentation was initially in detected in K-562 after 4 hours exposure in 13-MTD (80μg/ml),also 6, 12 and 24 hours DNA fragmentation could be demonstrated. For the Flow cytometry test, K-562 treated with 13-MTD（0,20,40,80 ug/ml）for 2, 4 and 6 hours demonstrated.There is no significant cell count differences between different phases of cell cycle. However, 7.6% apoptosis was shown in 13-MTD 80ug/ml after 6 hours in K-562. Finally, western blotting demonstrated that 13-MTD could induce p53, p21, Fas and Bax expression in dose-dependent (0, 20, 40, 80 ug/ml), and also time-dependent（6、12 and 24 hours）manners. These suggest that 13-MTD could induce its apoptosis through both extrinsic（related with death receptor） and intrinsic（related with caspase cascade pathways）.In conclusion, evidences shown above suggest that 13-MTD could probably effectively inhibit the cell proliferation,which could be induced through apoptosis of K-562 cells. |
| 顯示於類別: | [醫學研究所] 博碩士論文
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