豬泡疹病毒一型基因重組複合體與細胞蛋白質相互作用之研究 (1/2)

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題名:	豬泡疹病毒一型基因重組複合體與細胞蛋白質相互作用之研究 (1/2)
其他題名:	Study on the Interaction between Suid Herpesvirus 1 Recombination Complex and Cellular Proteins (I)
作者:	項千芸(Hsiang,Chien-Yun);吳世祿(Wu,Shih-Lu)
貢獻者:	醫學院醫學系學士班微生物學科
關鍵詞:	豬泡疹病毒一型;重組;去氧核糖核酸分解酵素;DNA 結合蛋白質;內核酸分解酵素G
日期:	2005-07-31
上傳時間:	2009-09-01 16:20:46 (UTC+8)
摘要:	豬泡疹病毒一型（suid herpesvirus 1, SHV-1）屬於泡疹病毒科（Herpesviridae）的一員，為假性狂犬病（pseudorabies）的致病原，同時也是研究泡疹病毒的重要模式。SHV-1 的基因體經rolling-circle replication、產生concatemer 的同時，會發生高頻率的重組現象。基因體重組現象的發生，易造成病毒毒力的回復，而使得臨床上疫苗載體及基因治療病毒載體的使用遭受困難及危險，且易因基因頻繁的交換，造成抗藥性病毒株大幅的出現。在筆者以往的研究中，已證實SHV-1 deoxyribonuclease（DNase）具有類似RecBCD 的切割活性，也發現SHV-1 DNA-binding protein（DBP）具有類似RecA 的功能，可以與病毒的DNase 結合，特異性的增強DNase exonuclease 的活性。而利用a sequence 分析重組複合物的組成，也初步求證出參與切割a sequence 的重組複合體可能包含SHV-1 DBP、SHV-1 DNase、及宿主細胞之endonuclease G（endoG）。此外由Western blot 分析病毒感染後蛋白質的變化，也發現DBP、DNase 及endoG 在病毒感染後的濃度會逐漸上升，而且這三種蛋白質出現的時間相類似。因此，筆者推測SHV-1 DBP、SHV-1 DNase、及宿主細胞之endoG 可能會形成重組複合體，以類似大腸桿菌RecA/RecBCD 的模式，藉由切割hot spot—a sequence 而造成基因體重組的現象。為了求證筆者的假說，本計畫擬執行二年，分成下列三部分加以探討。第一部份、探究SHV-1 DBP、DNase 與宿主細胞endoG 之間的physical interaction 及interaction domain。利用yeast two-hybrid system 及ELISA 研究這三種蛋白質之間是否會發生physical interaction，並研究參與這三種蛋白質交互作用的domain，進一步以這三種蛋白質為核心，結合病毒感染後的nuclear extract，建立protein linkage map，以期瞭解重組複合物的組成及作用的時序性；第二部份、探究SHV-1 DBP、DNase 與宿主細胞endoG 之間在基因重組步驟的functional interaction 及functional domain。我們擬測試這三種蛋白質在homologous pairing、strand invasion、strand exchange 及a sequence-specific cutting 等基因重組步驟中是否會發生 function interaction，抑制或增強蛋白質原有的功能；第三部份、探究SHV-1 DBP、DNase 與宿主細胞endoG 在病毒生活史中濃度及分佈的變化。我們擬利用Western blot 及 immunocytochemistry 分析這三種蛋白質在病毒感染後出現的時間及地點是否吻合，同時探究病毒感染細胞後活化endoG 的機制。藉由重組複合體的解讀，一方面可以瞭解病毒及細胞蛋白質如何發生交互作用，參與病毒的基因體重組，另一方面也可進一步與大腸桿菌RecA/RecBCD system 進行比對，使泡疹病毒成為研究真核細胞重組的模式。
顯示於類別:	[醫學系] 研究計畫

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