PIR51在DNA修補途徑的功能探討

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題名:	PIR51在DNA修補途徑的功能探討
作者:	蔡士彰(Shih-Chang Tsai)
貢獻者:	生命科學院生物科技學系
關鍵詞:	DNA 破壞和修復;同源重組;誘導細胞株;免疫沉澱法;蛋白質的穩定性;NA damage and repair;homologous recombination;inducible cell line,immunoprecipitation,protein stability
日期:	2008-07-31
上傳時間:	2009-09-01 15:09:19 (UTC+8)
摘要:	Pir51 是一個存在Rad51 複合體，但功能未知蛋白質。我們篩選從侵襲性與和緩性淋巴瘤病人樣品後，發現Pir51 高度表達在侵襲性淋巴瘤病人。結果顯示，Pir51 和Rad51 表示幾乎相同地被調控在細胞週期期間。我使用siRNA 去除細胞內Pir51 顯示，Pir51 增加mitomycin C 敏感性，進而得知Pir51 牽涉DNA 交鍵修復。Rad51 與腫瘤遏抑基因BRCA2 交互作用。BRCA2 在淋巴瘤、和攝護腺, 胰臟, 乳房, 和卵巢癌扮演重要角色。初步結果顯示， Pir51 與BRCA2 的蛋白質相互作用。我的提案著重於探討Pir51 在DNA 破壞和修復的生物性功能，並提供新洞察方向。第一年(2007年8月～2008年7月)目標: 做Pir51 剔除細胞株和Pir51 誘導表達細胞株我將使用二種方法探討Pir51 蛋白質的功能。一種是功能喪失策略,另一種是功能獲取策略。在功能喪失策略, 我們將做可誘導Pir51 剔除細胞株受四圜素調控。siPir51 表達質體已被構建和測試調控Pir51 蛋白質表達。在沒有四圜素時,遏抑因子緊緊與四圜素操作因子序列結合進而抑制基因表達。另一方法是功能獲取策略，將構建誘導Pir51 蛋白質表達的細胞株。第二年(2008年8月～2009 年7月)目標: 鑑定與Pir51 結合蛋白質 Rad51 已被證明與很多蛋白質結合包括RPA 、p53 、BRCA2 、ATM 、BRCA1 、和Ubc9。因為 Pir51 與Rad51 結合, 我們將使用免疫沉澱法去辨認Pir51 複合體。另外,我們將測試蛋白質譬如 BRCA1 、BRCA2 、FancD2, 和DSS 與Pir51 的結合情形，進而瞭解Pir51 蛋白質在DNA 修復途徑的生物性角色。我們將獲得很多資訊從Pir51 結合的蛋白質並將我們探索Pir51 的不同生物角色。第三年(2009年8月～2010 年7月)目標: 描繪Pir51 蛋白質的穩定性和確定Pir51 缺陷在DNA 受損的反應我們將由二個方向檢視Pir51 蛋白質的穩定性: ubiqitination 和phosphorylation 。另外, 我們將由使用Pir51 惕除細胞鑑認Pir51 在同源重組的特定階段和在非同源末端重組的作用。這些研究提供對在DNA 受損和修復控制的複雜機制之詳盡的理解。
顯示於類別:	[生物科技學系暨碩士班] 研究計畫

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